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本试剂盒适用于从各种昆虫组织样本中提取组蛋白。提取过程简单方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏，避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、组蛋白修饰实验比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

• 使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
  
• 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
  
• 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
  
• 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。

• 蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2～8℃保存，开盖使用后-20℃保存。
  
• 蛋白酶抑制剂在2～8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。

• 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
  
• 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
  
• 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
  
• 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。

• 提取液制备：
  每500μL蛋白提取液A中加入2μL蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
  注：
  ● 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
  ● 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完，再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。
  ● 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。。
  
• 收集酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5～10分钟，吸干上清，收集酵母细胞。
  
• 用冷PBS洗涤酵母细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  注：在1000×g离心5分钟。
  
• 每100～200mg湿重酵母细胞（或者100～200μL酵母沉淀体积）中加入250～500μL冷的酵母蛋白提取液E，充分混匀。
  注：
  ● 根据酵母细胞量调整提取液用量，一般加菌体体积的2～5倍均可。
  ● 按酵母菌体体积每100μL或100mg湿重菌体加入250～500μL提取液。
  ● 若后面步骤中试剂A处理时沉淀难以裂解，沉淀体积完全不减少，应延长此步试剂E的处理时间。
  
• 在室温或37℃条件下于振荡30分钟～2小时。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀。
  ● 不同酵母样本需要的时间差异较大，根据下游细胞裂解的难易程度调整，如果下游试剂A较难裂解，裂解后沉淀没有明显减少，需要延长此步骤处理时间。可以延长至2小时。
  
• 在4℃，2000×g条件下离心5～10分钟，弃上清，留沉淀。
  
• 在沉淀中加入500μL蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下轻轻振荡20～40分钟。
  注：
  ● 使用振荡器/摇床的较低转速，提取液能轻微晃动即可。
  ● 没有振荡条件也可以不振荡，稍微延长提取液的处理时间，中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。
  
• 在4℃，16000×g条件下离心15分钟，弃上清，留沉淀。
  
• 沉淀中加入100μL组蛋白提取液B。
  
• 用200μL枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀。
  
• 置4℃冰箱过夜存放。
  
• 在12000×g条件下离心10分钟，收集上清。
  
• 在上清中加入10～25μL试剂C充分混匀。
  
• 加入上样缓冲液混匀后煮沸，分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
  注：加入上样缓冲液液后应为上样缓冲液的蓝色，如果颜色变黄，可以再加入试剂C混匀，每次加入5μL，至恢复蓝色为止。

• 蛋白浓度低？
  处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂E和A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
  
• 用什么方法定量蛋白？
  建议用Bradford法。不适合用BCA法。